组织因子即凝血因子Ⅲ,也被称为促凝血酶原激酶或CD142,属于一种跨膜糖蛋白,分子量为47kD,由263个氨基酸残基构成,包括219个氨基酸组成的胞外区、23个氨基酸残基组成的跨膜区和由21个氨基酸残基组成的胞质内区,其中胞外区是组织因子的激活凝血功能区域。凝血因子Ⅲ既是凝血因子Ⅶ(FⅦ)在细胞表面的受体,又是FⅦ或激活的因子Ⅶ(FⅦa)的辅因子。
组织因子是人体内一种重要的凝血因子,存在于血管外组织中,是外源性凝血系统的启动蛋白,不仅通过与因子Ⅶ/ Ⅶa 结合而启动血液凝固级联反应,而且依靠组织因子与细胞膜的紧密结合发挥“锚”作用,使生理性凝血过程局限于损伤部位;同时,组织因子对创伤愈合,血管生成,组织重塑及炎症反应也起着重要作用。因此,组织因子作为一种重要的活性蛋白,在生物医药、临床凝血酶原时间测定和创伤止血中具有重要的应用价值。
人重组组织因子是通过基因工程手段对人组织因子功能区域多个位点突变、截断的人组织因子,含有243个氨基酸的组织因子蛋白由一个细胞外蛋白区域和一个跨膜结构域组成,不包含细胞内结构域。采用表达载体PET-28a,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)获得表达人重组组织因子的基因工程菌、IPTG诱导表达、位点靶向纯化的工艺制备重组组织因子。该蛋白具有结构稳定、高促凝血活性、高热稳定性的特点,在凝血试验中具有与全长分子相同的生物学能学活性。
技术性能指标:
1、外观:无色、透明液体
2、纯度:95%以上(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析)
3、分子量:27.4 Kd
4、凝血活性:测定正常人血浆凝血酶原时间低于10-13.0s