HE染色实验

 HE染色实验

HE染色法，即是苏木精-伊红染色法。石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。易于被碱性或酸性染料着色的性质分别称为嗜碱性和嗜酸性；若于两种染料的亲和力都不强，则呈中性。一般的组织变化和组织产物都可以通过这一染色法显示出来。是形态学最常用的染色方法。

染色结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。

材料与方法

1 材料

1.1 主要试剂

石蜡、无水乙醇、氨水、硫酸铝钾、碘酸钠、冰醋酸、甘油、苏木素、伊红

1.2 溶液配制

PBS溶液：600ml的ddH₂O中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na₂HPO₄和0.24g

KH₂PO₄，用HCl调节溶液pH至7.4，定容至1L，滤器过滤后，高压灭菌，室温保存。

1.3 主要仪器及耗材

正置显微镜、恒温烘箱、石蜡切片机 、摊片机、移液器、水浴锅

数字切片扫描仪：滨松 NanoZoomer( S210）公司产品

2 方法

2.1样本包埋与固定

（1）固定：根据需要取材后置于福尔马林中固定48小时后；

（2）洗涤与脱水：将固定后的组织用流水冲洗，去除残留的固定液和杂质。不同浓度的乙醇逐级脱水，50%、70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每级2小时。70%乙醇中可长期保存；

（3）透明：50%酒精+50%二甲苯中2小时，纯二甲苯两小时，再一次纯二甲苯两小时；

（4）浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍各3小时左右；

（5）包埋：将浸好蜡的组织块放入装有蜡液的容器中，摆好组织块位置。待石蜡凝固后将周围多余的石蜡去除，准备切片；

（6）切片：将切片刀装在刀片机的刀架上并固定紧，固定蜡块底座或蜡块，调整蜡块与刀至合适位置，刀刃与蜡块表面呈5度角。调整切片机上的切片厚度为4-7μm，然后切片。

2.2  HE染色

（1） 脱蜡：60℃、30min；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ；

（2）水化：将脱蜡后的切片经100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、双蒸水各3min ；

（3）将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，流水冲洗；

（4）1%盐酸酒精分化0.5-1min；

（5）流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻；

（6）碳酸锂饱和水溶液反蓝1min后流水冲洗；

（7）入70％和90％酒精中脱水各10min；

（8）入酒精伊红染色液染色2-3min；。

（9）脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明；

（10）封片：将已透明的切片滴上中性树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用；

2.3 图像采集

通过扫描，采集图片。

　送样运输要求：

　　样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。

　　切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。